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          層析柱安裝的每一個步驟都很關鍵

          發布時間:2016-12-22瀏覽:7054次

           層析柱安裝的每一個步驟都很關鍵

          層析柱是凝膠層析技術中的主體,一般用玻璃管或有機玻璃管。根據樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數不同,從而分離的一種層析法。層析柱的直徑大小不影響分離度,樣品用量大,可加大柱的直徑,一般制備用凝膠柱,直徑大于2厘米,但在加樣時應將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。此外, 直徑加大,洗脫液體體積增大,樣品稀釋度大。分離度取決于柱高,為分離不同組分,凝膠柱床必須有適宜的高度,分離度與柱高的平方根相關,但由于軟凝膠柱過高擠壓變形阻塞,一般不超過1米。分族分離時用短柱,一般凝膠柱長20-30厘米,柱高與直徑的比較5:1─10:1,凝膠床體積為樣品溶液體積的4-10倍。 分級分離時柱高與直徑之線為20:1─100:1,常用凝膠柱有50×25厘米,10×25厘米。層析柱濾板下的死體積應盡可能的小,如果支掌濾板下的死體積大,被分離組分之間重新混合的可能性就大,其結果是影響洗脫峰形,出現拖尾出象,降低分辯力。在分離時,死體積不能超過總床體積的1/1000。
          簡述層析柱的安裝流程:
          1、檢測層析柱的各個部件,確保干凈、完整,擰上下端堵頭,擰緊膨脹圈,然后將層析柱垂直 固定在鐵架臺上,將裝柱器安裝在層析柱上端。  
          2、往層析柱中加入適量的20%乙醇,打開下端口,重力流,排除下篩網中滯留的氣泡,在液面 低至1-2cm高度時關閉層析柱下端出口。
          3、用玻璃棒緊靠柱子內壁引流,將搖勻的介質加入到層析柱中,這可以減少氣泡的產生。迅速 用20%乙醇填滿柱子和裝柱器,裝上裝柱器蓋子,連接到?KTA上。
          4、打開層析柱下端,開始以30cm/h流速裝柱,直至柱床界面平穩,停止裝柱,打開裝柱器蓋子,用虹吸法去除界面上端的液體,去掉裝柱器,然后小心的用20%乙醇封滿 柱子剩余部分。
          5、擰緊膨脹圈,繼續用裝柱流速壓柱,至少保持3個柱體積,以界面不變為主,在界面處做上記號,關閉泵,并關閉柱子下端出口,使層析柱上端和泵斷開(轉接器上接口是打開的),略擰松 膨脹圈,緩慢向下轉動調節桿,到記號處停止,然后再擰緊膨脹圈,關閉上接口。
          如需了解更多關于層析柱的信息,歡迎大家繼續關注上海榮泰生化工程有限公司。

           

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