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            酶標板與多孔細胞培養板的差別

            發布時間:2016-03-30瀏覽:2190次

            酶標板與多孔細胞培養板的差別
            用多空細胞培養板測吸光度肯定可以拉,我們經常用它來做樣品的蛋白定量和MTT檢測。
            區別:酶標板一般要比細胞培養板貴,細胞板主要做細胞培養,但也可以用來測蛋白濃度;酶標板包括包被板和反應板,一般不能用做細胞培養,它主要做免疫酶聯反應后的蛋白檢測,它需要更高的要求還需要特定的酶標工作液。如下是個用酶標板檢測冠狀病毒IgM/IgG抗體例子:
            【操作步驟】
            1.加樣品:將標本稀釋液100ul(或2滴)加到包被板內(預留陰陽性及空白對照2-5孔),將待檢血清用PBS或生理鹽水按1:20稀釋后取10ul加入反應孔內。
            2.加對照:加入陰性對照1-3孔,陽性對照1孔,各100ul對照血清??瞻讓φ?孔空置。
            3.溫育:將反應板震蕩使樣品混勻后,置37℃溫箱或水浴反應20分鐘。
            4.洗板:用蒸餾水將濃縮洗滌液15ml稀釋至300ml。
            (1)手洗:將反應板孔內容物傾出,將洗滌液注滿反應孔,放置30秒鐘后用力甩去,如此重復5次后拍干。
            (2)機洗:5次,每孔注入洗滌液200ul或注滿,停留30秒鐘后吸盡拍干。
            5.加酶標工作液:每孔加入100ul(或2滴)酶標工作液,置37℃溫箱反應20分鐘后,洗板5次,洗板操作同步驟4。
            6.顯色和終止反應:將底物A、B液各50ul(或1滴)加到反應孔內,37℃避光顯色10分鐘。每孔加入終止液50ul(或1滴)混勻終止反應。
            【結果判定】
            1.酶標儀設定波長450nm,先用空白調零,然后測定各孔OD值;如果選用雙波長測定,不必設置空白對照孔。
            2.當陰性對照平均OD值小于0.08,陽性對照(pc)OD值大于0.30時,說明試劑盒有效且實驗操作正確,否則應當重復試驗。
            3.臨界值(CUT—OFF VALUE)=0.15+陰性對照平均(NC)OD值(當陰性平均OD值小于0.05時,按0.05計算;當陰性平均OD值大于或等于等于0.05時按實際值計算)。
            4.標本OD值≤臨界值為陰性,標本OD值>臨界值為陽性

             

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