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          酶標板的檢測操作步驟及其結果判定方法介紹

          發布時間:2015-01-13瀏覽:11297次

             酶標板一般要比細胞培養板貴,細胞板主要做細胞培養,但也可以用來測蛋白濃度;酶標板包括包被板和反應板,一般不能用做細胞培養,它主要做免疫酶聯反應后的蛋白檢測,它需要更高的要求還需要特定的酶標工作液。如下是個用酶標板檢測冠狀病毒IgM/IgG抗體例子:

            一、酶標板的檢測操作步驟:
            1.加樣品:將標本稀釋液100ul(或2滴)加到包被板內(預留陰陽性及空白對照2-5孔),將待檢血清用PBS或生理鹽水按1:20稀釋后取10ul加入反應孔內。
            2.加對照:加入陰性對照1-3孔,陽性對照1孔,各100ul對照血清??瞻讓φ?孔空置。
            3.溫育:將反應板震蕩使樣品混勻后,置37℃溫箱或水浴反應20分鐘。
            4.洗板:用蒸餾水將濃縮洗滌液15ml稀釋至300ml。
           ?。?)手洗:將反應板孔內容物傾出,將洗滌液注滿反應孔,放置30秒鐘后用力甩去,如此重復5次后拍干。
           ?。?)機洗:5次,每孔注入洗滌液200ul或注滿,停留30秒鐘后吸盡拍干。
            5.加酶標工作液:每孔加入100ul(或2滴)酶標工作液,置37℃溫箱反應20分鐘后,洗板5次,洗板操作同步驟4。
            6.顯色和終止反應:將底物A、B液各50ul(或1滴)加到反應孔內,37℃避光顯色10分鐘。每孔加入終止液50ul(或1滴)混勻終止反應。
            二、酶標板的檢測結果判定:
            1.酶標儀設定波長450nm,先用空白調零,然后測定各孔OD值;如果選用雙波長測定,不必設置空白對照孔。
            2.當陰性對照平均OD值小于0.08,陽性對照(pc)OD值大于0.30時,說明試劑盒有效且實驗操作正確,否則應當重復試驗。
            3.臨界值(CUT—OFF VALUE)=0.15+陰性對照平均(NC)OD值(當陰性平均OD值小于0.05時,按0.05計算;當陰性平均OD值大于或等于等于0.05時按實際值計算)。
            4.標本OD值≤臨界值為陰性,標本OD值>臨界值為陽性。
            酶標板經表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基,其疏水鍵由親水鍵取代。該類酶標板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值,其表面可通過離子鍵與帶負電荷的小分子結合。由于其表面的親水特性和可通過其它交聯劑共價結合的能力,可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污劑的蛋白分子。該類板的缺陷為由于降低了疏水性,一部分蛋白分子無法結合;此外,其表面需有效地封閉。由于親水和共價的表面特性,使用的封閉液必須能夠與非反應性氨基基團和所選擇的交聯劑中任何功能基團發生作用。

           

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