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          你需要知道的層析柱知識

          發布時間:2020-03-27瀏覽:2729次

            收好這一份層析柱使用指南,幫您在實驗過程中從容應對各種突發狀況,更好的完成實驗操作。
           
            1.層析柱進氣泡怎么辦?
           
            空氣進入,如緩沖液走空,連接進入系統過程中
           
            ○ 用純水反向沖洗,如果有柱位閥可直接切換流向,沒有的話可將柱子反接
           
            ○ 對于大多數層析柱來說可用乙醇沖洗,以提高排氣效率
           
            緩沖液中有氣泡
           
            ○ 上柱前將緩沖液脫氣
           
            ○ 在緩沖液入口使用空氣感應器
           
            溫度影響,如在冷室操作后馬上在室溫操作,或低溫緩沖液直接在室溫使用
           
            ○ 將緩沖液在使用前達到熱平衡
           
            2.層析柱干了還可以再使用嗎?
           
            ○ 通常不可以,但也取決于具體的純化需求。
           
            3.膠平面與柱頭有間隙怎么辦?
           
            由于不當裝填或者篩網孔徑與填料粒徑不匹配,導致填料漏出
           
            ○ 更換篩網,重新裝填,層析柱堵塞,導致反壓增大
           
            ○ 根據說明書清洗
           
            ○ 更換濾膜
           
            ○ 樣品上柱前先澄清
           
            柱床裝填太差,裝柱過程中未有效壓縮填料
           
            ○ 調整柱頭高度,測柱效填料被用于條件,如有機溶劑
           
            ○ 檢查緩沖液,選擇合適的緩沖液條件
           
            4.怎樣避免由于樣品導致的壓力增大?
           
            顆粒性物質——堵塞濾膜和層析柱
           
            ○對于濾膜吸附較高的的樣品,體積較小時,可以用離心代替過濾,比如10000g離心15分鐘
           
            ○ 細胞裂解液可50000g離心30分鐘
           
            ○ 可以使用醋酸纖維素膜或者PVDF膜,其對蛋白的非特異性吸附較低
           
            ○ 選擇合適孔徑的濾器
           
            沉淀或者聚體堵塞層析柱
           
            ○ 過濾
           
            ○ 通過改變pH,加鹽或添加劑穩定樣品或減少聚體產生
           
            ○ 避免機械壓力和過高的蛋白濃度
           
            核酸——過高粘度可能會封閉填料上的配基
           
            ○ 加入核酸酶
           
            ○ 使用硫酸鏈霉素,聚乙烯亞胺或硫酸魚精蛋白沉淀
           
            脂類——可能封閉填料上的配基或堵塞濾膜和層析柱
           
            ○ 離心
           
            ○ 使用硫酸銨,硫酸葡聚糖或PVP沉淀
           

           

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