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          層析柱使用常見問題盤點

          發布時間:2017-10-30瀏覽:8425次

             層析柱使用常見問題盤點

            “ 層析柱進氣泡怎么辦? ”
            答疑解惑層析柱進氣泡有多種可能的原因,對于這些不同的原因,要采取不同的措施,才能事半功倍,解決氣泡困擾:
            1.空氣進入層析柱(如:緩沖液走空,連接層析柱進入系統過程中等)
            用純水反向沖洗層析柱(如有柱位閥可直接切換流向,沒有的話可將柱子反接
            對于大多數層析柱來說可用乙醇沖洗,以提高排除氣泡的效率
            2.緩沖液中有氣泡采取預防措施將緩沖液脫氣
            在緩沖液入口使用空氣感應器
            使用限流閥
            3.溫度影響(在冷室操作后緊接著在室溫操作或低溫緩沖液直接在室溫使用)采取預防措施允許緩沖液在使用前達到熱平衡
            “ 層析柱干了還可以再使用嗎? ”
            答疑解惑通常來說是不可以的,但也取決于您的純化需求。如果您的層析柱看起來像圖中這樣,不妨一試??蓪⑷芤阂越咏盍蟴ui大耐受壓力的流速流經層析柱以排除空氣。結束之后,進行柱效測定,滿足您的要求便可繼續使用;如未成功排除氣泡,則層析柱需要重裝。
            “ 膠平面與柱頭有間隙怎么辦? ”
            答疑解惑造成間隙的有多種可能的原因,對于這些不同的原因,要采取不同的措施,才能事半功倍,解決間隙困擾
            1.由于不當裝填或者篩網孔徑與填料粒徑不匹配,導致填料漏出
            更換篩網,重新裝填
            2.層析柱堵塞,導致反壓增大
            根據說明書清洗層析柱
            更換濾膜采取預防措施澄清樣品
            3.柱床裝填太差(裝柱過程中未有效壓縮填料)
            調整柱頭高度,測柱效
            4.填料被用于條件,如有機溶劑
            檢查緩沖液選擇更加合適的使用條件
            “ 怎樣避免由于樣品導致的壓力增大 ”
            答疑解惑不同雜質會帶來不同的不良影響,對于這些不同的原因,要采取不同的措施,才能事半功倍,解決壓力增大困擾
            1.顆粒性物質——堵塞濾膜和層析柱離心過濾有吸附的小體積樣品可用10000 g 離心15分鐘
            細胞裂解液可50000g離心30分鐘過濾醋酸纖維素膜或PVDF膜具有zui少的非特異性蛋白吸附
            選擇合適孔徑的濾器
            2.沉淀——聚集體堵塞層析柱
            過濾
            通過改變pH,加鹽或添加劑穩定樣品或減少聚體產生
            避免機械壓力和過高的蛋白濃度
            3.核酸——過高粘度可能會封閉填料上的配基
            加入核酸酶
            使用硫酸鏈霉素,聚乙烯亞胺或硫酸魚精蛋白沉淀
            4.脂類——可能封閉填料上的配基或堵塞濾膜和層析柱
            離心
            使用硫酸銨,硫酸葡聚糖或PVP沉淀

           

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